纖毛(也稱(chēng)為鞭毛)是突出于真核細胞表面的一類(lèi)細胞器,由纖毛膜、軸絲和基底部的基體組成,負責感受外界刺激(如光、聲、味、機械力和各類(lèi)化學(xué)分子等)并將這些胞外信號傳導到胞內,細胞對這些信息進(jìn)行應答。研究表明定位于細胞膜的許多重要的信號分子包括G蛋白偶聯(lián)受體、離子通道以及其他類(lèi)型的信號蛋白均特異性定位于纖毛膜,這是決定纖毛進(jìn)行信息傳遞的分子基礎。目前已知,纖毛信號分子通過(guò)與分子動(dòng)力蛋白(motor proteins)驅動(dòng)的鞭毛內運輸體(intraflagellar transport(IFT)train)進(jìn)行偶聯(lián),從而使其得以沿著(zhù)纖毛微管軸突在細胞膜和纖毛膜之間動(dòng)態(tài)運動(dòng)。纖毛信號分子在纖毛膜和細胞膜之間循環(huán)運輸過(guò)程中,由八種保守蛋白(BBS1/2/4/5/7/8/9/18)組成的蛋白復合物BBSome在纖毛信號分子和鞭毛內運輸體之間充當連接體(adaptor),其功能就是把纖毛信號分子偶聯(lián)到鞭毛內運輸體從而使其得以依賴(lài)于IFT在纖毛膜和細胞膜間進(jìn)行動(dòng)態(tài)運送。因此,能夠導致BBSome組分缺失、組裝缺陷或纖毛定位異常的基因突變,均可引發(fā)纖毛信號分子在纖毛膜內異常缺失或積累,從而導致巴德-畢德氏綜合癥(Bardet-Biedl syndrome,BBS)。亮氨酸拉鏈轉錄因子1 (LZTFL1) 可通過(guò)控制BBSome的含量來(lái)介導纖毛信號,是迄今為止發(fā)現的第17個(gè)與BBS有關(guān)的基因,LZTFL1基因突變會(huì )引發(fā)惡性腫瘤,繼而發(fā)展為癌癥。然而,迄今為止,這一過(guò)程背后的機制仍不明確。
2021年8月26日,PNAS在線(xiàn)發(fā)表了天津科技大學(xué)樊振川團隊完成的題為Chlamydomonas LZTFL1 mediates phototaxis via controlling BBSome recruitment to the basal body and its reassembly at the ciliary tip的研究論文。全式金生物參與了該項研究,完成了RNA-seq等相關(guān)實(shí)驗環(huán)節,在該項研究中發(fā)揮了重要作用。該研究以萊茵衣藻為模式生物,利用遺傳、生化、細胞和單分子體內活體成像及RNA測序分析等技術(shù),闡明了LZTFL1通過(guò)調控BBSome向基底和纖毛尖端的重組來(lái)維持BBSome的纖毛動(dòng)力學(xué)。
這項研究的主要發(fā)現歸納為:1) 低濃度的LZTFL1在纖毛基底聚集;2)LZTFL1在纖毛中擴散,并在纖毛尖端與IFT分離的BBSome結合;3)LZTFL1促進(jìn)BBSome進(jìn)入纖毛;4)LZTFL1通過(guò)BBS3將BBSome送到基體;5)LZTFL1是穩定IFT25/27所必需的;6)IFT25/27促進(jìn)了在纖毛尖端的BBSome重新組裝;7)LZTFL1是一種趨光性的正調節因子,當纖毛中BBSome的異常積累或丟失,會(huì )破壞了纖毛BBSome的動(dòng)力學(xué),從而阻止了萊茵衣藻的趨光性。其中,在證明LZTFL1能穩定IFT25/27的實(shí)驗中,發(fā)現天然LZTFL1和LZTFL1::YFP均存在于細胞質(zhì)中,這與LZTFL1從細胞質(zhì)轉移到細胞核來(lái)抑制IFT25/27的轉錄的假設相反。因此,全式金生物利用RNA-seq分析,比較CC-125和LZTFL1miRNA細胞中mRNAs的表達,發(fā)現在LZTFL1miRNA細胞中,有234個(gè)基因表達出現上調,422個(gè)基因表達出現下調(圖A),22個(gè)IFT蛋白mRNA保持在WT水平(圖B)。接著(zhù)通過(guò)qPCR分析了LZTFL1miRNA細胞中IFT25、IFT27、IFT22、IFT46、IFT70、IFT38、IFT57、IFT43和IFT139的mRNA水平,發(fā)現它們均處于WT水平,表明除了IFT25/27外,LZTFL1不影響其他IFT的mRNA含量。
CC-125和LZTFL1miRNA細胞中轉錄水平差異分析
全式金核酸純化系列產(chǎn)品TransZol Up Plus RNA Kit(ER501)與二代測序系列產(chǎn)品 MagicPure? RNA Beads (EC501)、TransNGS? RNA-Seq Library Prep Kit for Illumina? (KP601)攜手助力該項研究,這也是全式金首次以合作者的身份登上PNAS雜志。
全式金迄今為止已獲授權發(fā)明專(zhuān)利18篇,我們始終相信科技創(chuàng )新是企業(yè)發(fā)展的原動(dòng)力。未來(lái)我們將繼續秉持“品質(zhì)高于一切,精品服務(wù)科研”的理念,為客戶(hù)提供高品質(zhì)產(chǎn)品,助力科研,與客戶(hù)一起共同成長(cháng)。
ER501: TransZol Up Plus RNA Kit
產(chǎn)品說(shuō)明
本試劑盒適用于從細胞和組織中提取總RNA,用TransZol Up裂解樣品,加入氯仿后,溶液分為無(wú)色水相和粉紅色有機相,RNA在水相中;用硅膠膜離心柱特異吸附水相中的RNA,與其它總RNA提取方法相比,既具有TransZol Up裂解能力強、提取量高,應用范圍廣的優(yōu)點(diǎn),又具有離心柱提取RNA純度高的優(yōu)點(diǎn)。
特點(diǎn)
(1)應用范圍廣:動(dòng)物、植物組織、病毒和細菌等樣品。小量樣品(50-100 mg組織、5×106 細胞、200 μl血液)。大量樣品( ≥1 g 組織或≥107細胞),離心柱的最大吸附量為100 μg。
(2)裂解能力強:裂解充分、速度快,提取量高。
(3)提取速度快:一個(gè)小時(shí)內即可完成。
(4)操作可視化:溶液呈粉紅色,便于分離水相。
(5)提取純度高:DNA和蛋白質(zhì)的污染低。
特點(diǎn)
操作簡(jiǎn)便,適用于自動(dòng)化工作站。
與競品的比較
分別使用TransGen和Company V產(chǎn)品對不同輸入量的人總RNA進(jìn)行純化,使用Qubit對純化前后的RNA進(jìn)行濃度測定,來(lái)確定RNA Beads的回收率。結果表明,不同RNA Beads的回收率無(wú)明顯差異。
與競品純化回收率比較
KP601: TransNGS? II Stranded RNA-Seq Library Prep Kit for Illumina?
特點(diǎn)
(1)高文庫轉化率。
(2)高數據質(zhì)量。
適用范圍
(1)全轉錄組測序。
(2)基因表達分析。
(3)單核苷酸變異分析。
(4)可變剪切檢測。
(5)融合基因檢測。
(6)非編碼RNA和RNA前體分析。
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