核仁是真核細胞間期核中最明顯的結構。它位于細胞核中。為生殖做出了貢獻，并聚集著(zhù)核糖體。曾經(jīng)集合的核糖體從細胞核中出來(lái)，進(jìn)入細胞質(zhì)。對核仁結構、動(dòng)態(tài)和功能的研究,不僅為早期細胞學(xué)家所密切注意,而且在20世紀60年代發(fā)現核仁的重要功能以后,也一直受到各相關(guān)領(lǐng)域研究者的高度重視。

 2021年7月30日，中國科學(xué)院分子細胞科學(xué)卓越創(chuàng )新中心（生物化學(xué)與細胞生物學(xué)研究所）陳玲玲研究組和劉珈泉研究組在《Science》發(fā)表了合作研究成果“l(fā)ncRNA SLERT controls phase separation of FC/DFCs to facilitate Pol I transcription”，并獲同期Perspectives專(zhuān)評。該研究首次揭示了長(cháng)非編碼RNA SLERT以RNA分子伴侶機制改變互作核仁蛋白DDX21構象進(jìn)而影響FC/DFC區域的大小和流動(dòng)性，維持RNA聚合酶I高效轉錄生成核糖體RNA。

（A）左上：體外相分離實(shí)驗中，纖維狀DDX21的形成隨蛋白濃度降低而減弱；左下：在不同的實(shí)驗體系中，不同濃度的DDX21蛋白呈現不同的分子狀態(tài)，SLERT可以增加DDX21蛋白的流動(dòng)性；右：體內實(shí)驗和體外重構實(shí)驗中，SLERT通過(guò)結合DDX21增加FC/DFC轉錄單元的大小和流動(dòng)性。

（B）DDX21分子抱團聚集在核仁DFC區域的外側，并且限制FC/DFC區域的大小和流動(dòng)性。SLERT調控DDX21的構象由開(kāi)放轉為閉合，DDX21分子呈現低聚的疏松狀態(tài)，為Pol I的高效轉錄提供合適的空間環(huán)境。Pol I轉錄發(fā)生在FC和DFC的交界處，DDX21卷曲纏繞rDNA阻止Pol I轉錄復合物在rDNA的占位。SLERT調控DDX21的構象和流動(dòng)性抑制DDX21對rDNA的纏繞從而促進(jìn)Pol I轉錄。

 該工作首次發(fā)現SLERT以RNA分子伴侶機制調控蛋白質(zhì)的構象和多聚狀態(tài)并且觀(guān)察到單分子水平下蛋白質(zhì)微觀(guān)相分離的功能特征和調控機制。蛋白質(zhì)的多聚狀態(tài)與其流動(dòng)性，分子間相互作用以及功能發(fā)揮直接相關(guān)，RNA分子伴侶通過(guò)跨越數量級調控核仁蛋白質(zhì)相分離特性維持細胞核仁正常的形態(tài)功能，對lncRNA領(lǐng)域和相分離領(lǐng)域的深入研究具有重大意義。

 全式金無(wú)縫拼接系列產(chǎn)品pEASY^?-Basic Seamless Cloning and Assembly Kit(CU201)與感受態(tài)細胞產(chǎn)品Transetta(DE3) Chemically Competent Cell(CD801)攜手助力該項研究。

產(chǎn)品優(yōu)勢：

1、pEASY^?-Basic Seamless Cloning and Assembly Kit(CU201)

 利用特殊的重組酶和同源重組的原理，可以將任意方法線(xiàn)性化后的載體和與其兩端具有15-25 bp 重疊區域的PCR 片段定向重組，可實(shí)現1-5 個(gè)片段的高效無(wú)縫拼接。

 - 快速：僅需要15分鐘反應時(shí)間。

 - 簡(jiǎn)單：不受片段酶切位點(diǎn)的影響，無(wú)需對片段酶切。

 - 高效：陽(yáng)性率達95%以上。

 - 無(wú)縫：不引入額外的序列。

單片段高效連接實(shí)驗

 1 kb PCR 片段插入pUC19 載體后，PCR 鑒定插入效果。結果顯示，插入片段的陽(yáng)性率達100%。

單片段插入后，挑取60 個(gè)單克隆菌落進(jìn)行PCR 鑒定

M: Trans2K^? Plus II DNA Marker

不同長(cháng)度單片段連接實(shí)驗

 不同長(cháng)度PCR片段（50 bp、2 kb、5 kb、8 kb）分別插入PG載體后，分別用內切酶酶切鑒定插入效果。結果顯示，不同長(cháng)度的PCR片段均正確插入PG載體。

單片段插入后酶切

不同長(cháng)度多片段連接實(shí)驗

 不同長(cháng)度PCR片段(600 bp，900 bp，1200 bp，1500 bp，1800 bp，片段兩端設計Nde I酶切位點(diǎn))，混合后插入pUC19載體后，Nde I酶切鑒定插入效果。結果顯示，不同長(cháng)度的PCR片段均正確插入pUC19載體。

多片段插入后酶切

2、Transetta(DE3) Chemically Competent Cell(CD801)

 Transetta（DE3）是采用進(jìn)口菌株，特殊工藝制作，可用于DNA的化學(xué)轉化。細胞具有氯霉素(Cam^r)抗性。使用pUC19質(zhì)粒DNA檢測，轉化效率可達10⁷ cfu/μg DNA。使用Control Plasmid I (Amp⁺)用于檢測細胞是否具有表達功能，表達蛋白大小為25 kDa。

特點(diǎn)

 該菌株是攜帶氯霉素抗性質(zhì)粒BL21的衍生菌，補充大腸桿菌缺乏的6種稀有密碼子（AUA， AGG， AGA，CUA， CCC， GGA）對應的tRNA，提高外源基因，尤其是真核基因在原核系統中的表達水平。

相關(guān)產(chǎn)品推薦：

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