小鼠胚胎發(fā)育由合子開(kāi)始，經(jīng)過(guò)2細胞、4細胞、8細胞和桑椹胚，形成囊胚，之后繼續發(fā)育形成胚內和胚外組織。具有最高潛能的干細胞被稱(chēng)為全能性干細胞，一般指體內的合子，2/4細胞，它可以發(fā)育到胚內和胚外組織。多能性干細胞，一般來(lái)源于囊胚的內細胞團，它的發(fā)育潛能是受限的，只能發(fā)育到胚內組織。1981年，人們首次在體外成功分離了第一株小鼠多能性胚胎干細胞系（ESC）。直到40年后的今天，所有培養的小鼠胚胎干細胞都處于多能狀態(tài)，人們一直致力于體外建立發(fā)育潛能更高的干細胞。表達全能性基因Zscan4s和Mervl的2C-like細胞是最早報道的能夠產(chǎn)生胚內和胚外組織的細胞。
近日北京大學(xué)杜鵬課題組在Cell雜志在線(xiàn)發(fā)表了題為“Mouse totipotent stem cells captured and maintained through spliceosomal repression”的研究論文。在這項研究中，作者通過(guò)抑制剪接體，實(shí)現了小鼠全能性干細胞的體外建立和培養，且這種細胞在分子和功能上接近體內2細胞和4細胞時(shí)期胚胎，因此被命名為totipotent blastomere-like cells（TBLCs）。
此項研究首次建立了體外捕獲和培養全能性干細胞的方法，而且令人驚奇的發(fā)現了揭示了剪接體在干細胞命運轉變中的重要決定作用。故此，該成果不但對于早期胚胎發(fā)育相關(guān)的基礎研究提供了新的體外研究體系，同時(shí)也為未來(lái)干細胞相關(guān)的臨床醫學(xué)研究提供了新型的發(fā)育潛能極高的“種子細胞”來(lái)源。
全式金慢病毒產(chǎn)品TransLvTM Lentivirus qPCR Titration Kit (FV201)被該團隊選中，為慢病毒滴度滴定實(shí)驗環(huán)節提供了強有力的保障。
本產(chǎn)品提供了一種利用qPCR方法檢測慢病毒轉導細胞中整合的前病毒序列拷貝數的方法。慢病毒包裝后轉導易感細胞 (如HT1080，HEK-293T等)，提取慢病毒轉導細胞基因組，進(jìn)行qPCR反應，通過(guò)標準曲線(xiàn)Cq值計算整合的前病毒拷貝數，進(jìn)而得到確定的慢病毒滴度。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
★ 操作簡(jiǎn)單、靈敏度高。
★ 提供內參基因作為參照，測得慢病毒滴度更準確。
★ 兼容第二代和第三代HIV-1 慢病毒包裝載體。
★ 檢測范圍廣，標準曲線(xiàn)在103-108 copies/μl 范圍內呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。
主要步驟圖
上圖表示Provirus Gene ( 藍色) 和Reference Gene ( 紅色) 以各標準品對應的Cq 值為縱坐標，相應拷貝數Log 值為橫坐標繪制的標準曲線(xiàn)，其中Provirus Gene R2= 1.000，擴增效率為97.1%；Reference Gene R2= 0.999，擴增效率為95.8%。
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